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- ¿Por qué no hay amplificación en la PCR??
- ¿Por qué mi ADN no se amplificó??
- ¿Qué sucede si no se agregan cebadores a la PCR??
- ¿Cómo se corrige la amplificación no específica en PCR??
¿Por qué no hay amplificación en la PCR??
Puede resultar una amplificación insuficiente si la cantidad inicial de plantilla es demasiado baja. Aumente el número de ciclos de amplificación en incrementos de 5 o, si es posible, aumente la cantidad de plantilla. Los contaminantes en la mezcla de dNTP pueden provocar una amplificación incompleta o incorrecta o una inhibición de la PCR. Utilice dNTP de alta calidad.
¿Por qué mi ADN no se amplificó??
1) es posible que tenga un mal diseño de cebador o una estandarización de la reacción (por lo tanto, evalúe el diseño de su cebador y haga, como ya han dicho otros, una PCR de gradiente para evaluar diferentes temperaturas de hibridación); 2) No hay ADN (es posible que su protocolo de extracción haya fallado) y, por lo tanto, sus cebadores solo pueden aparearse entre sí (o combinarlos).
¿Qué sucede si no se agregan cebadores a la PCR??
Pregunta: Si olvidó agregar los cebadores a su reacción de PCR, ¿qué pasaría y por qué?? 1. Su reacción fallaría porque la polimerasa Taq no puede agregar bases sin una pequeña porción de ADN ya presente. ... Su reacción fallaría porque no habría enzima que pudiera agregar nuevas bases de nucleótidos.
¿Cómo se corrige la amplificación no específica en PCR??
Utilice menos ciclos cuando la concentración de la plantilla sea alta y utilice más ciclos cuando la concentración de la plantilla sea baja. 2. El tiempo de extensión fue demasiado largo: un tiempo de extensión excesivo puede permitir una amplificación inespecífica. Generalmente, use un tiempo de extensión de 1 min / kb.
