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Ajustar las temperaturas de recocido, ya que las altas concentraciones de aditivos o codisolventes de PCR debilitan la unión del cebador al objetivo. Aumente la cantidad de ADN polimerasa o use ADN polimerasas con alta procesividad.
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- Errores de secuencia en los extremos de los productos de PCR.
- Amplificación de falso positivo.
- Recursos.
- ¿Cuáles son las soluciones de problemas comunes que pueden ocurrir en PCR??
- ¿Por qué no funciona mi PCR??
- ¿Qué causa el frotis de PCR??
- ¿Qué sucede si la temperatura de recocido es demasiado alta??
¿Cuáles son las soluciones de problemas comunes que pueden ocurrir en PCR??
Guía de resolución de problemas de PCR
| Problema | Causas |
|---|---|
| Rendimiento de producto de PCR bajo o nulo | Las temperaturas de extensión y recocido del programa del termociclador no son óptimas |
| Falta la reacción Taq polimerasa u otro componente de reacción | |
| Concentración de imprimación demasiado baja | |
| La secuencia diana no está en la plantilla de ADN |
¿Por qué no funciona mi PCR??
Olvidar solo un componente de la reacción de PCR, ya sea la ADN polimerasa, los cebadores o incluso la plantilla de ADN, resultará en una reacción fallida. La solución más simple es repetir la reacción. ... Si aún no hay un producto de PCR después de esto, es probable que haya algo más que obstaculice su reacción.
¿Qué causa el frotis de PCR??
La contaminación del ADN, el ARN en la muestra de ADN, una alta concentración de ADN en la reacción de PCR pueden causar manchas. ... Manchas de ADN generalmente causadas en plantas debido a una alta concentración de ADN molde.
¿Qué sucede si la temperatura de recocido es demasiado alta??
La temperatura de recocido era demasiado alta
Si la temperatura de recocido es demasiado alta, los cebadores no pueden unirse a la plantilla. La regla general es usar una temperatura de recocido que sea 5 ° C más baja que la Tmetro de la cartilla.
