Solución de problemas de Takara pcr

En cambio, será necesario optimizar las condiciones de la PCR; tenga en cuenta lo siguiente al ajustar las condiciones de PCR:

1. Reducir la cantidad de plantilla.
2. Aumente la temperatura de recocido.
3. Utilice PCR de contacto.
4. Reducir el número de ciclos de PCR.
5. Rediseñar los cebadores.
6. Utilice imprimaciones anidadas.
7. Vuelva a amplificar el producto.

1. ¿Por qué no funciona mi PCR??
2. ¿Cómo se optimizan las condiciones de PCR??
3. ¿Qué causa la mancha en la PCR??
4. ¿Cómo saber si la PCR está contaminada??

¿Por qué no funciona mi PCR??

Olvidar solo un componente de la reacción de PCR, ya sea la ADN polimerasa, los cebadores o incluso la plantilla de ADN, resultará en una reacción fallida. La solución más simple es repetir la reacción. ... Si aún no hay producto de PCR después de esto, es probable que haya algo más que obstaculice su reacción.

¿Cómo se optimizan las condiciones de PCR??

Condiciones de PCR

1. Utilice temperaturas de desnaturalización más altas (e.gramo., 98 ° C en lugar de 94 ° C o 95 ° C) para permitir la desnaturalización completa de la plantilla.
2. Mantenga los tiempos de recocido para las plantillas ricas en GC lo más cortos posible.
3. Utilice cebadores con una T más alta_metro (>68 ° C), porque el recocido puede ocurrir a una temperatura más alta.

¿Qué causa la mancha en la PCR??

La contaminación del ADN, el ARN en la muestra de ADN, una alta concentración de ADN en la reacción de PCR pueden causar manchas. ... Manchas de ADN generalmente causadas en plantas debido a una alta concentración de ADN molde.

¿Cómo saber si la PCR está contaminada??

Para verificar si la solución está contaminada, ensamble las reacciones de control negativo usando reactivos nuevos que se sepa que no están contaminados y agregue una de las soluciones sospechosas a cada reacción. Esa reacción muestra productos amplificados indicativos de contaminación es evidencia de que la solución agregada estaba contaminada.